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上一篇《細胞計數儀知識分享系列 I 性能檢測篇》中，我們發現全自動細胞計數儀在檢測細胞樣品的重復性和梯度稀釋的結果準確性上，都比半自動插板式細胞計數儀更有優勢。那么大家可能會問：

導致這樣的性能差異原因是什么？

目前市場上許多公司都自詡所賣的細胞計數儀是全自動的，那我們又如何區分哪個是全自動，哪個是半自動？

本文我們將給大家介紹下全自動和

半自動細胞計數儀性能差異的原因

以及如何快速地鑒別全/半自動細胞計數儀

PART 01

全自動和半自動

細胞計數儀性能差異的原因

首先，我們對臺盼藍染色的圖像法細胞計數儀的檢測過程做下回顧，下面6個步驟是細胞計數和活率分析的基本流程。

傳統顯微鏡下手工細胞計數（如下所示），前面5步操作都要操作人員來手動完成。因為人為操作帶來的誤差不可避免，導致結果差異有時會很大，甚至超出通常可以接受的±10%偏差范圍。并且隨著樣品數越多，操作人員容易造成眼疲勞，無法繼續進行有效并準確地計數。

手工顯微鏡法細胞計數的照片和計算方法

因此，插板式半自動細胞計數儀應運而生，它省去了操作人員肉眼觀察和統計死活細胞數的步驟，但剩下幾個步驟還需要手動完成，包括吸液加樣、臺盼藍染色和上樣分析（有時還要手動對焦），測試結束后需更換新的細胞計數板做下一批樣品。

半自動細胞計數儀的三種計數板手動加樣照片

相比全自動細胞計數儀，半自動細胞計數儀存在以下問題導致計數結果重復性和準確性要差：

1. 細胞樣品和臺盼藍的體積需要移液槍手動定量，而且混勻也是手動來完成，因此不可避免地產生人為操作誤差。

2.  從搖瓶培養的幾十毫升或生物反應器幾十到上百升的細胞樣品中，吸取20-30uL體積的樣品進行檢測，由于取樣量少，容易引起取樣代表性差，結果不準確的問題。

3. 儀器一般只拍1-3張照片，分析統計的細胞數量相對少，結果的代表性相對較差。

同時，染色后的細胞樣品通過移液槍加到計數板上，有時會操作不當產生氣泡，特別是細胞培養液中含有較多易產生氣泡的蛋白，這種問題更容易發生。另外，廢棄的細胞計數板還會產生二次固體污染，這些問題目前都沒有好的解決方法。

那有沒可能細胞的混懸和染色，以及細胞的計數和分析過程全部實現自動化，同時不用手動更換新的細胞計數板而自動做下一個樣品呢？答案是使用全自動細胞計數分析儀。

PART 02

如何快速鑒別

全自動和半自動細胞計數儀？

結合細胞計數和活率分析的檢測過程，除了要放入待檢測的樣品外，全自動細胞計數儀可以讓儀器自動完成樣品的混懸、臺盼藍染色、細胞拍照和識別、測試結果的分析統計和顯示。

相比半自動細胞計數儀，全自動細胞計數儀有以下一些特點可供大家快速鑒別。

1. 自動混懸和臺盼藍染色

全自動細胞計數儀的一個顯著特點是能夠自動完成細胞的吹打混懸和臺盼藍染色。

要擁有這個特點，儀器必須具備下面兩個功能。

首先，儀器內部要有步進馬達，準確控制細胞樣品和臺盼藍等體積混合。然后，儀器還要可以自動混勻染色，能將細胞樣品和臺盼藍進行有效地染色處理。而這兩步操作，對于半自動細胞計數儀而言，還只能通過手動操作來完成。

2.自動管路清洗

全自動細胞計數儀內部有一個流通池，可用于流過的細胞拍照成像，所以就不需要細胞計數板這個耗材。當樣品檢測結束后，儀器需要自動對流通池進行清洗，并在清洗結束后將管路內液體切換到對細胞友好的磷酸緩沖液，等待下一個樣品的檢測。

所以，除了對細胞拍照的光路系統和用于數據控制的電子系統外，相比半自動細胞計數儀，全自動細胞計數儀還有一個清洗管路的液路系統，并通過八通閥的切換完成細胞的染色和管路清洗。因此，一般大家看到的全自動細胞計數儀體積會相對大一些。

全自動細胞計數儀檢測原理示意圖和結構組成

3. 高通量和不間斷檢測

全自動細胞計數儀的另一個特點是高通量和不間斷檢測。待測樣品可以先放到轉盤或96孔板上，根據軟件中設置好的分析條件，儀器會自動按要求分別對這些細胞樣品完成計數和活率分析。

Vi-CELL BLU細胞計數儀的兩種上樣模塊

以貝克曼庫爾特生命科學Vi-CELL BLU全自動細胞計數儀為例，使用轉盤一次可以放21個樣品，而使用孔板最多可以放96個樣品進行分析測試。若使用24位轉盤，在檢測過程中還可以實現不間斷上樣測試，即樣品測試過程中，還可以放入新的待測樣品。所以，在操作便捷性上，全自動細胞計數儀也是優于半自動細胞計數儀。

 總之，全自動細胞計數儀在細胞樣品混懸和染色方面避免了人為操作帶來的誤差，同時儀器能自動清潔管路和過夜清洗，而且可以高通量上樣和不間斷測試。因此，不管是細胞計數的重復性和準確性，還是儀器操作的便捷性上，全自動細胞計數儀都比半自動插板式細胞計數儀更有優勢。

希望大家可以通過此文介紹的以上這些特點，在面對琳瑯滿目的細胞計數儀時，能夠快速有效地鑒別出細胞計數儀是“真”全自動還是“假”全自動。

除了儀器測試結果的重復性和準確性，對于生物制藥的質量控制和生產部門，儀器軟件的法規符合度也是一個很重要的點。所以，下一期的細胞計數儀知識分享，我們將為您提供法規符合度方面的內容介紹。