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美國**BTX是專業(yè)的細胞融合、電穿孔儀的生產(chǎn)廠家。ECM 630電穿孔儀在轉基因的應用領域中得以廣泛的應用,其無以倫比的高性能得到了全球同行的厚愛。BTX的系列產(chǎn)品適用于動植物、細菌、酵母、哺乳動物、人類細胞(包括活體細胞)的轉基因等操作,操作方法可參照相關文獻,及向廠商索要。ECM 630電穿孔儀是多才多藝型細胞轉基因儀,適應于各類細胞.
ECM 630電穿孔儀應用舉例:
10-500V電壓:適用于哺乳動物細胞,植物細胞
50-2500V電壓:適用于細菌、酵母各種型號,均有多種脈沖選擇
•細菌/酵母轉化(系統(tǒng):ECM399/630)
電穿孔現(xiàn)在被認作是轉化細菌及酵母的***的方法。革蘭氏陰性細菌(例如大腸桿菌)一般比革蘭氏陽性細菌更容易轉化,因為他們的細胞壁組成不同。對于革蘭氏陰性細菌常常可以獲得10的10次方轉化2/微克DNA的轉化效率,而對于革蘭氏陽性細菌,一般可以得到10的6次方轉化2/微克DNA。Chang等人(1997)成功對一個mtz-敏感的Heliobacterpylori菌株進行電穿孔以傳遞mtz抵抗性。Planelles等人(1999)使用電穿孔轉化大腸桿菌,以避免使用包裝物質。*近電穿孔儀器方面的進展將使研究人員能夠進一步優(yōu)化細菌轉化(例如脈沖長度產(chǎn)生方面擴展的功能條件)。
RNA、DNA、蛋白質以及小分子都已經(jīng)通過電穿孔的方法轉入酵母。沒有必要在電穿孔前部分去除酵母細胞壁,因為在完整酵母電穿孔方面的進展可以產(chǎn)生高的轉化率。Faber等人(1994)年優(yōu)化了S.Cerevisiae的實驗方案,使用HansenulaPolymorpha獲得了比以前的報告增加300倍的轉化效率。
在質粒修復中,質粒從酵母轉入大腸桿菌以進行詳細的DNA序列分析,這是另外一種重要的技術。這種兩個步驟的過程被電穿孔進行了簡化,用于驗證隱性基因的結構,將其導入酵母,看基因性和表現(xiàn)性之間的關系。已經(jīng)建立了標準的實驗方案使用指數(shù)衰減波發(fā)生器例如BTXECM630轉化細菌/酵母。使用方形波電穿孔儀的實驗方案,例如BTXECM830,來轉化細菌/酵母。研究人員還成功將大的質粒(BAC及YAC)導入細菌。電穿孔杯是細胞及酵母電穿孔的*常用附件,而Model747共軸電極使用則變得越來越普遍。
•動物細胞轉染(系統(tǒng):ECM630/830)
對真核細胞的轉染可以通過多種方法獲得,例如磷酸鈣沉淀、脂質體轉染、病毒方法以及電穿孔。電穿孔已經(jīng)被正式對傳統(tǒng)的轉染方法不靈的細胞有很好的效果,因此被選為**的分子傳遞系統(tǒng)。電穿孔的好處有可重復性、更高的效率、大量樣本處理、無毒性以及容易使用(不需要孵育時間)。
Lofin等人(1999)對NIH/3T3細胞進行電穿孔使mRNA進入,以研究細胞周期及細胞分化過程中mRNA對基因表達調節(jié)、控制。Bodwell等人(1999)在對COS-7細胞進行電穿孔是使用較長的脈沖時間后獲得了較高水平的表達。Warner等人(1997)使用電穿孔方法成功轉化了淋巴細胞。IncyteGenomics公司成功使用BTX電穿孔儀轉染了ES細胞進行轉基因小鼠的生產(chǎn)。BTXECM399\630\830型儀器、電穿孔杯以及多種特用的電極都用于動物細胞轉染用途。
•蛋白質電整合/電插入(系統(tǒng):ECM630/830)
將蛋白質導入細胞以及將蛋白質插入至細胞膜中也可以通過電穿孔來實現(xiàn)。不光肽段,而且包括抗體的多種蛋白,也可以進行導入。Ushio-Fukai等人(1998)對電穿孔插入哺乳動物細胞中的外源蛋白進行了定量。對于這些用途可以使用多種BTX電極。
•植物細胞轉化(系統(tǒng):ECM630/830)
對植物原生質(玉米、煙草等)及完整植物的電穿孔可以用于產(chǎn)生對農(nóng)業(yè)/園藝有用的轉基因作物。植物細胞轉化的一個主要目的是對植物細胞進行穩(wěn)定轉化以產(chǎn)生具有優(yōu)良品質及產(chǎn)量增加的作物。Lin等人(1997)優(yōu)化了多種植物上用于GUS表達的電穿孔條件,結果顯示完整植物細胞以及原生質都可以進行有效轉化。Diaz等人(1994)針對小麥及燕麥的葉和根的原生質進行了相似的優(yōu)化試驗,證明了電穿孔對于植物工作的有效性。這些作者也比較了電穿孔與PEG的差別,結果發(fā)現(xiàn)電穿孔更有效、更有重復性、更經(jīng)濟。BTX是世界上體內轉染用特殊電極的**者。對于這些用途可以使用多種BTX電極,例如2針陣列、游標尺電極、以及Tweezertrodes。
暫無數(shù)據(jù)!