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美國**BTX是專業(yè)的細(xì)胞融合、多功能細(xì)胞電穿孔儀 的生產(chǎn)廠家。自從1983年起，苛求的科研工作者就已經(jīng)把BTX多功能細(xì)胞電穿孔儀作為電融合、電穿孔等應(yīng)用領(lǐng)域的**儀器。ECM多功能細(xì)胞電穿孔儀在轉(zhuǎn)基因的應(yīng)用領(lǐng)域中得以廣泛的應(yīng)用，其無以倫比的高性能得到了全球同行的厚愛。BTX的多功能細(xì)胞電穿孔儀系列產(chǎn)品適用于動植物、細(xì)菌、酵母、哺乳動物、人類細(xì)胞（包括活體細(xì)胞）的轉(zhuǎn)基因等操作，

BTX還在網(wǎng)站建立了技術(shù)數(shù)據(jù)庫，提供超過5000份的參考目錄和600多份的protocols供科研工作者免費(fèi)查閱。

多功能細(xì)胞電穿孔儀應(yīng)用舉例

•動物細(xì)胞轉(zhuǎn)染（系統(tǒng)：ECM630/830）

對真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染可以通過多種方法獲得，例如磷酸鈣沉淀、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、病毒方法以及電穿孔。電穿孔已經(jīng)被正式對傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染方法不靈的細(xì)胞有很好的效果，因此被選為**的分子傳遞系統(tǒng)。電穿孔的好處有可重復(fù)性、更高的效率、大量樣本處理、無毒性以及容易使用（不需要孵育時間）。

Lofin等人（1999）對NIH/3T3細(xì)胞進(jìn)行電穿孔使mRNA進(jìn)入，以研究細(xì)胞周期及細(xì)胞分化過程中mRNA對基因表達(dá)調(diào)節(jié)、控制。Bodwell等人（1999）在對COS-7細(xì)胞進(jìn)行電穿孔是使用較長的脈沖時間后獲得了較高水平的表達(dá)。Warner等人（1997）使用電穿孔方法成功轉(zhuǎn)化了淋巴細(xì)胞。Incyte Genomics公司成功使用BTX電穿孔儀轉(zhuǎn)染了ES細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因小鼠的生產(chǎn)。BTX ECM399\630\830型儀器、電穿孔杯以及多種特用的電極都用于動物細(xì)胞轉(zhuǎn)染用途。

•蛋白質(zhì)電整合/電插入 （系統(tǒng)：ECM630/830）

將蛋白質(zhì)導(dǎo)入細(xì)胞以及將蛋白質(zhì)插入至細(xì)胞膜中也可以通過電穿孔來實(shí)現(xiàn)。不光肽段，而且包括抗體的多種蛋白，也可以進(jìn)行導(dǎo)入。Ushio-Fukai等人（1998）對電穿孔插入哺乳動物細(xì)胞中的外源蛋白進(jìn)行了定量。對于這些用途可以使用多種BTX電極。

•植物細(xì)胞轉(zhuǎn)化（系統(tǒng)：ECM630/830）

對植物原生質(zhì)（玉米、煙草等）及完整植物的電穿孔可以用于產(chǎn)生對農(nóng)業(yè)/園藝有用的轉(zhuǎn)基因作物。植物細(xì)胞轉(zhuǎn)化的一個主要目的是對植物細(xì)胞進(jìn)行穩(wěn)定轉(zhuǎn)化以產(chǎn)生具有優(yōu)良品質(zhì)及產(chǎn)量增加的作物。Lin等人（1997）優(yōu)化了多種植物上用于GUS表達(dá)的電穿孔條件，結(jié)果顯示完整植物細(xì)胞以及原生質(zhì)都可以進(jìn)行有效轉(zhuǎn)化。Diaz等人（1994）針對小麥及燕麥的葉和根的原生質(zhì)進(jìn)行了相似的優(yōu)化試驗(yàn)，證明了電穿孔對于植物工作的有效性。這些作者也比較了電穿孔與PEG的差別，結(jié)果發(fā)現(xiàn)電穿孔更有效、更有重復(fù)性、更經(jīng)濟(jì)。BTX是世界上體內(nèi)轉(zhuǎn)染用特殊電極的**者。對于這些用途可以使用多種BTX電極，例如2針陣列、游標(biāo)尺電極、以及Tweezertrodes。

•貼壁細(xì)胞的轉(zhuǎn)染----ACT （系統(tǒng)：ECM630/830）

除了對盛在普通樣品杯的懸浮細(xì)胞進(jìn)行電穿孔外，還可以對多種培養(yǎng)板上的貼壁細(xì)胞進(jìn)行原位電穿孔。這樣可以避免用胰酶消化細(xì)胞，有助于保持細(xì)胞的活性及細(xì)胞數(shù)目。Lewis等人（1999）使用培養(yǎng)皿電極將基因轉(zhuǎn)染入人類及靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。Paptis等人（1998）通過對長在導(dǎo)電載玻片的NIH/3T3細(xì)胞進(jìn)行原位電穿孔研究信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。Teruel等人（1999）也對位于載玻片上的海馬神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)入DNA、RNA以及多種大分子。BTX為貼壁細(xì)胞的轉(zhuǎn)染（ACT）提供了PP35-2、366、747、840及Epizap電極系統(tǒng)。請關(guān)注不久后為這些用途開發(fā)的新產(chǎn)品

•高通量篩檢----HTS （系統(tǒng)：ECM630/830）

高通量篩檢及cDNA文庫的建立，需要一次處理多個樣本的能力。使用傳統(tǒng)樣品杯花費(fèi)很大而且有時間限制。然而，96孔板里使用的電極對于這些類型的應(yīng)用肯定有用。Hoffma-Tsay等人（1994）使用96孔共軸電極在植物融合實(shí)驗(yàn)中檢測8種化學(xué)物質(zhì)。Peterfy等人（1995）比較了多種類型的多孔電極，將DNA傳遞入COS-7細(xì)胞。Marrero等人（1997）使用多孔電極將抗體電導(dǎo)入血管平滑肌細(xì)胞，以誘導(dǎo)細(xì)胞增值。BTX目前提供747和840用于這樣的用途，并且不斷開發(fā)新的產(chǎn)品。

體內(nèi)基因?qū)耄↖VGD）（系統(tǒng)：ECM830）

在體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移的非病毒技術(shù)中，直接將質(zhì)粒DNA注射進(jìn)入肌肉內(nèi)是簡單、廉價(jià)及安全的。Aihara及Miyazaki（1998）**次指出通過在肌肉內(nèi)將DNA注射與電穿孔相結(jié)合，可以將表達(dá)增強(qiáng)100倍。

Mir等人（1999）使用多種類型的電極將基因傳遞進(jìn)入多種種屬的骨骼肌（大鼠、小鼠、兔、猴）。他們的結(jié)果顯示通過使用電穿孔以及DNA注射：（1）基因轉(zhuǎn)移的效率大大增加了，只是表達(dá)增強(qiáng)2-4倍；（2）不同實(shí)驗(yàn)之間的差別縮小了，而這正是單獨(dú)DNA注射的主要缺點(diǎn)；（3）表達(dá)持續(xù)時間很長（數(shù)月），這對于長期臨床應(yīng)用非常重要；（4）不同種屬的不同的肌肉都有陽性的反應(yīng)，說明廣泛的可用性；（5）基因表達(dá)非常特異僅在局部，而周圍組織則沒有影響到。這種技術(shù)成功用于其他組織，例如肝、睪丸、以及皮膚。

*近Vicat等人（1999）通過體內(nèi)電穿孔儀將基因傳遞如小鼠腦組織。與被稱為有力的腦組織基因轉(zhuǎn)移的非病毒載體的pCMV-luc與PolyEthylenlmine聯(lián)合的方法相比，電穿孔的效率要高50倍。Nishi等人證明使用電穿孔可以獲得有效的神經(jīng)膠質(zhì)瘤基因轉(zhuǎn)移。Nishi還顯示對實(shí)體瘤進(jìn)行電基因治療后腫瘤生長阻滯了50-90%。Dean等人將基因電導(dǎo)入完整的腸系膜動脈獲得了成功。電穿孔已經(jīng)被證實(shí)確實(shí)是進(jìn)行體基因/藥物轉(zhuǎn)移方面一項(xiàng)有前途的技術(shù)，有許多新奇的用途。BTX公司特制的2針陣列電極、Genetrodes、卡鉗電極、Tweezertrodes提供將基因侵入性以及侵入性轉(zhuǎn)移入組織的方法。

卵內(nèi)基因轉(zhuǎn)移（IOGD） （系統(tǒng)：ECM830）

Muramatsu等人（1997）比較了3種轉(zhuǎn)染方法用于將外源基因轉(zhuǎn)入早期雞胚進(jìn)行表達(dá)。他發(fā)現(xiàn)與脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染及基因槍相比，電穿孔是***的方法。Takeuchi等人（1999）使用電穿孔技術(shù)將早期雞胚轉(zhuǎn)染了tbx5及tbx4基因，以確定肢芽的翅/腿標(biāo)志。

對于這種用途已經(jīng)開發(fā)出特用的電極。Genetrodes、L形狀針電極，被用于測定雞胚及靶向組織的特定區(qū)域。許多研究人員已經(jīng)轉(zhuǎn)染了眼、心或者肢體組織，方便了發(fā)育生物學(xué)方法的進(jìn)一步研究。剛上市的足控開關(guān)具有遙控功能，是ECM830可以在不需要手操作的情況下進(jìn)行激活，這對于卵內(nèi)、體內(nèi)以及體外胚胎用途非常重要。

體外胚胎基因轉(zhuǎn)移（IVEGD）（系統(tǒng)：ECM830）

Tasaki等人（1999）討論了使用電穿孔在體外小鼠胚胎方面的運(yùn)用。小鼠胚胎有柱狀的結(jié)構(gòu)而且有比家禽更多胚胎培養(yǎng)基操作需求。有可能對胚胎進(jìn)行電穿孔用于異位表達(dá)研究。在小鼠中后腦部的基因表達(dá)已經(jīng)被觀察。這個技術(shù)也用在交配后9.5天小鼠胚胎，以研究Hu基因在神經(jīng)分化中的功能。BTX為這些目的提供一種全新的電極：Genepaddles。

•胚胎操作/核移植/動物克隆 （系統(tǒng)：ECM2001/830）

核移植是將細(xì)胞核從供體轉(zhuǎn)入受體的過程。細(xì)胞核指導(dǎo)胚胎的發(fā)育，導(dǎo)致新生體安全出生。在這個過程中，電融合用于將供體細(xì)胞與受體卵細(xì)胞融合，并進(jìn)一步激活細(xì)胞分裂，形成胚胎。Meng等人（1997）將核移植技術(shù)擴(kuò)展至靈長類動物模型，克隆出恒河猴。技術(shù)的進(jìn)步使研究人員能夠從分裂球進(jìn)展至更高分化的胚胎細(xì)胞以及靜止的胚兒細(xì)胞，作為核的供應(yīng)來源。胚胎產(chǎn)生的細(xì)胞在體外培養(yǎng)6-13代，然后在轉(zhuǎn)入前使用血清饑餓的方法使細(xì)胞靜止。如前文所述，Roble、Cibelli以及Stice是**次在1998年報(bào)告使用非老化胚成纖維細(xì)胞作為核的供體進(jìn)行核移植而產(chǎn)生綿羊克隆轉(zhuǎn)基因牛的人。Ian Wilmut在1996年震驚了整個世界，他從成年乳腺的細(xì)胞產(chǎn)生出**個動物克隆——多利。使用分化的成年細(xì)胞進(jìn)行克隆的能力打開了核移植廣泛運(yùn)用的大門即基因治療的令人激動的模式。*近的成功事例PPL Therapeutics公司從成年體細(xì)胞克隆出豬。對于這些用途可以使用多種細(xì)胞融合樣品池及微型載玻片。