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凱氏定氮法是測定蛋白質(zhì)/氮含量的常用方法，該方法簡單易操作，但由于實驗過程中涉及到的步驟以及使用的試劑較多，因此出現(xiàn)問題后排查起來會費時費力。本文匯總了客戶在凱氮實驗中常見的應(yīng)用問題，并逐一分析給出解決方法，旨在幫助客戶發(fā)現(xiàn)問題并及時排查解決。

問

1.1 稱量誤差：

檢查天平是否平穩(wěn)，天平周圍是否有其他儀器干擾，是否有靜電干擾

1.2 樣品或標(biāo)準(zhǔn)品污染：

重新取樣，或更換標(biāo)準(zhǔn)品

1.3 玻璃器皿污染：

清洗玻璃器皿

1.4 蒸餾殘留：

減少液體總量，300mL 樣品管中的樣品量應(yīng)不超過 150mL，以避免樣品量過多噴濺嚴(yán)重；在堿加入樣品管前，使用水稀釋樣品管中酸也能減低噴濺程度

1.5 實驗環(huán)境中有游離氨：

檢查進行定氮的實驗室是否放置了氨水等含揮發(fā)性氨試劑

1.6 滴定劑濃度錯誤：

檢查滴定液的計算和濃度、 摩爾反應(yīng)系數(shù)（每摩爾鹽酸含 2 摩爾 H+、每摩爾硫酸含 2 摩爾 H+）、滴定劑系數(shù)；對滴定酸進行標(biāo)定，重新計算

1.7 滴定系統(tǒng)、滴定管、玻璃管中有空氣：

檢查滴定酸液位，如滴定酸不足及時補充，并在滴定系統(tǒng)上進行排液操作

1.8 pH 電極故障：

使用標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)電極，必要時進行更換，如使用標(biāo)準(zhǔn)緩

沖鹽進行校準(zhǔn)多次仍不能通過滴定儀要求則建議更換

1.9 手工滴定指示劑變性：

重新配置母液

1.10 計算錯誤：

重新計算，更換實驗員對實驗結(jié)果核對

問

2.1 稱量誤差：

檢查天平是否平穩(wěn)，天平周圍是否有其他儀器干擾，是否有靜電干擾

2.2 滴定劑濃度錯誤：

檢查滴定液的計算和濃度、 摩爾反應(yīng)系數(shù)（每摩爾鹽酸含 2 摩爾 H+、每摩爾硫酸含 2 摩爾 H+）、滴定劑系數(shù)；對滴定酸進行標(biāo)定，重新計算

2.3 樣品或標(biāo)準(zhǔn)品污染：

重新取樣，或更換標(biāo)準(zhǔn)品

2.4 樣品中的氮含量較高：

減少樣品量，樣品中氮含量不可超過 200mg

2.5 樣品轉(zhuǎn)移過程損失：

避免天平轉(zhuǎn)移到樣品管過程中，樣品損失，或掛壁

2.6 玻璃器皿污染：

清洗玻璃器皿

2.7 消解硫酸不足：

增加硫酸用量（依據(jù)經(jīng)驗，一般常量法比如 1g 左右樣品試用 20mL 濃硫酸，半微量法使用 10 mL 濃硫酸）

2.8 消化時發(fā)生泄漏：

檢查抽吸模塊密封性

2.9 消解時發(fā)生噴濺：

調(diào)整加熱檔，使消解儀緩慢升溫，避免樣品因噴濺造成損失

2.10 催化劑與硫酸比例不對：

糾正催化劑與濃硫酸的使用比例在 1：3—1：2

2.11 消解未完成：

延長消解時間，保證樣品澄清后繼續(xù)消解 30 分鐘

2.12 消解后未完全冷卻：

消解后冷卻至少 30 分鐘

2.13 NaOH 加入量不足或所用的 NaOH 濃度不正確 (應(yīng)為 32 %)：

糾正用量，直到可以觀察到在堿加入后樣品顏色發(fā)生變化

2.14 蒸餾時發(fā)生泄漏：

進行蒸汽力度測試

2.15 滴定劑濃度錯誤：

檢查滴定液的計算和濃度、 摩爾反應(yīng)系數(shù)、滴定劑系數(shù)；對滴定酸進行標(biāo)定，重新計算

2.16 pH 電極故障：

使用標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)電極，必要時進行更換，如使用標(biāo)準(zhǔn)緩沖鹽進行校準(zhǔn)多次仍不能通過滴定儀要求則建議更換

2.17 手工滴定指示劑變性：

重新配置母液

2.18 計算錯誤：

重新計算，更換實驗員對實驗結(jié)果核對

問

3.1 稱量誤差：

檢查天平是否平穩(wěn)，天平周圍是否有其他儀器干擾，是否有靜電干擾

3.2 樣品非均質(zhì)：

由于樣品的不均質(zhì)導(dǎo)致結(jié)果不平行，請重新均質(zhì)樣品

3.3 樣品或標(biāo)準(zhǔn)品污染：

重新取樣，或更換標(biāo)準(zhǔn)品

3.4 樣品轉(zhuǎn)移過程損失：

避免天平轉(zhuǎn)移到樣品管過程中，樣品損失，或掛壁

3.5 玻璃器皿污染：

清洗玻璃器皿

3.6 消解時發(fā)生噴濺：

調(diào)整加熱檔，使消解儀緩慢升溫，避免樣品因噴濺造成損失

3.7 消化時發(fā)生泄漏：

檢查抽吸模塊密封性

3.8 尾氣吸收抽吸力不足：

檢查尾氣吸收儀管路密封性，定期清洗尾氣吸收儀的泵

3.9 消解期間抽吸力太強：

使用旁路閥降低尾氣吸收裝置的抽吸力

3.10 消解未完成，消解時間太短：

延長消解時間，保證樣品澄清后繼續(xù)消解 30 分鐘

3.11 蒸餾時發(fā)生泄漏：

進行蒸汽力度測試

3.12 蒸餾和滴定時攪拌器不工作：

清洗攪拌器，必要時進行更換

3.13 滴定系統(tǒng)、滴定管、樣品管中有氣泡：

檢查滴定酸液位，如滴定酸不足及時補充，并在滴定系統(tǒng)上進行排液操作

3.14 pH 電極校準(zhǔn)不正確或未校準(zhǔn)：

使用標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)電極，必要時進行更換，如使用標(biāo)準(zhǔn)緩沖鹽進行校準(zhǔn)多次仍不能通過滴定儀要求則建議更換

3.15 滴定管被堵塞、松脫、太短或損壞：

檢查滴定管，清潔或重新連接

3.16 手工滴定指示劑變性：

重新配置母液

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