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“天然的保肝藥” 都是怎么來的？

水飛薊素被成為“天然的保肝藥”，是從菊科植物水飛薊的干燥果實(shí)中提取而得到的一種黃酮木脂素類化合物。該類化合物具有清除自由基，抗脂質(zhì)過氧化，保護(hù)肝細(xì)胞膜，促進(jìn)肝細(xì)胞修復(fù)再生，抗肝纖維化，降血脂等效果。

黃酮類化合物（flavonoids），原是指以2-苯基色原酮為骨架衍生的一類化合物的總稱。現(xiàn)泛指兩個(gè)苯環(huán)通過三個(gè)碳原子相互連接而成的一系列化合物的總稱，即具有C6-C3-C6結(jié)構(gòu)的一類化合物的總稱。大量研究表明黃酮類化合物還具有降壓、降血脂、抗衰老、提高機(jī)體免疫力、瀉下、鎮(zhèn)咳、祛痰、解痙及抗變態(tài)等藥理活性。

1 介紹

本文中將會(huì)介紹一種簡便、可靠的方法，用來測定金盞菊中黃酮類化合物含量的應(yīng)用。黃酮類化合物是多酚類次生代謝產(chǎn)物，對(duì)人體的生物利用度較低。一旦被吸收，黃酮類化合物被迅速代謝，產(chǎn)生具有抗炎、氧化、血栓形成、糖尿病和癌癥特性的代謝物。黃酮類化合物存在于水果，蔬菜，谷物，樹皮，根莖，花茶和葡萄酒中。在本文中，金盞菊粉末通過使用全頻固液萃取儀  E-800 用索氏熱萃取法提取，用紫外分光光度法測定黃酮類化合物的含量。

2 設(shè)備

• 固液萃取儀 E-800 pro

• 分析天平(精度 ±0.1mg)

• 紫外/可見分光光度計(jì)(PerkinElmer Lambda 25)

3 樣品和試劑

• 樣品：含花萼的金盞菊干粉，參考黃酮類含量：0.29%

• 試劑：丙酮，六水氯化鋁，甲醇 HPLC，六亞甲基四胺純化物，無水硫酸鈉，去離子水

4 實(shí)驗(yàn)流程

黃酮類含量的測定包括以下步驟:分別用丙酮和酸水解同時(shí)提取和分解，形成黃酮類苷。黃酮類苷以結(jié)合態(tài)（黃酮苷）或自由態(tài)（黃酮苷元）形式存在，乙酸乙酯液液萃取黃酮類苷元，紫外/可見分光光度法測定黃酮類含量。

1. 樣品制備

• 將萃取紙濾筒放入索氏萃取腔中

• 稱取 0.8g 均質(zhì)樣品到紙濾筒中

• 在樣品上加入 1.0mL 試劑

• 在紙濾筒內(nèi)加入 7.0mL 鹽酸（濃度37%)

2. 使用表1中參數(shù)設(shè)置用 E-800 進(jìn)行提取

表1：UniversalExtractor E-800 的索氏熱萃取參數(shù)

3. 液液萃取

將提取液轉(zhuǎn)移到 100ml 的容瓶中。將所得溶液 20ml 轉(zhuǎn)移到分離漏斗中，加入 20ml 去離子水，用乙酸乙酯洗滌溶液，進(jìn)行液-液萃取。收集有機(jī)相用 2x50mL 去離子水洗滌，用無水硫酸鈉干燥后過濾有機(jī)相，將液體直接轉(zhuǎn)移到 50ml 容量燒瓶中。

4. UV / Vis分光光度法

試驗(yàn)溶液:取 10.0 mL 原液，加入 1mL 氯化鋁試劑，用 5% 冰醋酸在甲醇中稀釋至 25.0mL。30 分鐘后，測定測試溶液的吸光度，并在 425nm 處進(jìn)行比較。

5. 計(jì)算

以金絲桃苷表示的黃酮百分比含量按式計(jì)算。

金絲桃苷的吸光度為 500 (1%，d=1cm)

5 結(jié)果

金盞菊樣品被分成三份分析。測定的黃酮類化合物含量與參考值 0.29% 吻合較好。由于黃酮類化合物含量低，小的偏差導(dǎo)致較高的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。因此，定義了 5% 的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果如表2所示。

表2:金盞菊提取物類黃酮含量測定結(jié)果

6 結(jié)論

采用全頻固液萃取儀 E-800 對(duì)金盞菊粉末中黃酮類化合物的含量進(jìn)行測定，結(jié)果可靠，重復(fù)性好。與文獻(xiàn)中描述的方法進(jìn)行了比較。省略了提取過程中的費(fèi)力步驟，獲得更高的黃酮類化合物含量，殘留損失較少，使用全自動(dòng)萃取儀成功完成實(shí)驗(yàn)。步琦助力研究人員進(jìn)行各類天然產(chǎn)物的提取與分析，提供更高效便捷、更人性化、更對(duì)自然友好的解決方案。

▲E-800萃取儀